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Manuale del software Luminex xPONENT

Misurazioni ripetitive di

granuli xMAP

In un'analisi xMAP, il segnale reporter rappresenta il risultato

dell'analisi. A causa delle dimensioni ridotte dei granuli, una

sospensione di granuli xMAP presenta una cinetica di reazione

vicina alla fase di soluzione. Ciò significa che ciascun set di granuli

xMAP utilizzato per una particolare analisi mostrerà una

distribuzione statisticamente uniforme di molecole reporter legate

alla superficie di ciascun granulo. Durante l'acquisizione dati,

vengono analizzati numerosi granuli di ciascun gruppo e il software

calcola la statistica mediana di quel gruppo. Quanti più granuli di un

gruppo vengono misurati, maggiore è l'affidabilità di quella

particolare misurazione.

Classificazione e

fluorocromi reporter

Ciascun set di granuli xMAP è colorato internamente con due

coloranti di classificazione. Il segnale di fluorescenza di questi due

coloranti consente la classificazione di ciascun set di granuli. Poiché

ciascun granulo viene analizzato singolarmente, anche quando i

gruppi sono mescolati in un'analisi multiplex possono essere ancora

distinti tramite i loro segnali di emissione. Il segnale di fluorescenza

delle molecole reporter legate alla superficie di ciascun set di granuli

viene misurato e utilizzato per determinare il risultato di ciascuna

analisi in una multiplex. Anche in questo caso, poiché ciascun

granulo viene analizzato singolarmente, i segnali reporter di ciascun

set di granuli possono essere quantificati in modo preciso.

La tabella che segue mostra i fluorocromi reporter accettabili e la

loro lunghezza d'onda di eccitazione e di emissione.

Volume campione I volumi campione - o le dimensioni campione - variano da 20 a

200 µL. Accertarsi che del campione rimanga nel pozzetto dopo

l'aspirazione; circa 25 µL in più rispetto al volume campione. Questa

quantità può variare a seconda del tipo di piastra utilizzato. Dopo

l'acquisizione, l'analizzatore Luminex lava le linee campione, il che

produce la riespulsione di circa 160 µL di fluido guaina nel pozzetto.

Accertarsi che ci sia spazio sufficiente per aggiungere questa quantità

al pozzetto senza che gli altri pozzetti trabocchino e vengano

contaminati.

Lunghezze d'onda dei fluorocromi reporter

R-ficoeritrina Alexa 532

Peso formula (Daltons) 240.000 470

Assorbanza max (nm) 480.546.565 531

Estinzione max (M

-1

)

1.960.000 83.800

Emissione max (nm) 578 554

Rendimento quantico 0,82 0,8

1 2 ... 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 ... 147 148

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